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Dois novos vírus recombinantes altamente patogênicos da gripe aviária (H5N1) clado 2.3.4.4b.2 foram identificados em aves migratórias mortas na China em novembro de 2021. Os vírus provavelmente evoluíram entre aves selvagens através de diferentes vias aéreas que conectam a Europa e a Ásia. Sua baixa reação antigênica ao antisoro da vacina indica alto risco para as aves e para a saúde pública.
Desde que o vírus influenza aviário altamente patogênico da linhagem Gs/GD/96 (HPAIV) (H5N1) foi identificado em 1996, os H5 HPAIVs evoluíram para clados divergentes e causaram surtos contínuos em aves (1 – 11 ) . Além disso, transmissões de longa distância de H5 HPAIVs dentro de um período relativamente curto indicam um papel crucial das aves migratórias na disseminação global de HPAIVs ( 7 , 8 ). Até agora, os vírus H5 passaram por pelo menos 4 ondas de transmissão intercontinental: H5N1 clade 2.2 durante 2005–2006, H5N1 clade 2.3.2.1c durante 2009–2010, H5N8 clade 2.3.4.4a e H5N1 clade 2.3.2.1c durante 2014– 2015, e clado H5Ny 2.3.4.4b durante 2016–2017 ( 2 – 8 ).
A partir de 2020–2021, uma nova onda de surtos de HPAIV H5N1/H5N8 clade 2.3.4.4b foi relatada em aves selvagens e domésticas na Eurásia ( 9 – 11 ) e na África (https://wahis.woah.org/#/event-management
link externo). Casos humanos de infecção por H5N1/H5N6/H5N8 foram esporadicamente documentados (https://www.who.int/teams/global-influenza-programme/avian-influenza/monthly-risk-assessment-summarylink externo
), destacando o risco zoonótico de H5 HPAIVs. Desde 2021, H5 HPAIVs causaram pelo menos 9 surtos em aves selvagens em vez de aves domésticas na China continental (http://www.moa.gov.cn/gk/yjgl_1/yqfblink externo;http://www.xmsyj.moa.gov.cn/yqfblink externo). No entanto, grandes surtos de H5N1 HPAIVs em aves domésticas foram relatados durante 2021–2022 na Europa e nos Estados Unidos ( https://www.cdc.gov/flu/avianflu/data-map-commercial.html ) (A. Kandeil et al., dados não publicados,https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-2136604/v1link externo). Neste estudo, exploramos a origem genética, os padrões de disseminação e a antigenicidade dos vírus H5N1 identificados em 2 aves migratórias mortas na China.
O estudo
Coletamos amostras de swab oral e tecidos pulmonares de um cisne bravo morto no norte da China (Mongólia Interior) em 3 de novembro de 2021 e um cisne negro morto no leste da China (Zhejiang) em 15 de novembro de 2021. Realizamos o isolamento do vírus em 10- embriões de galinha livres de patógenos específicos de um dia de idade ( 12 ), então resultados confirmados por PCR quantitativo de transcrição reversa (Mabsky Biotech,http://www.mabsky.comlink externo).
Nós isolamos e sequenciamos Sanger 3 vírus, A/whooper swan/Northern China/11.03 IMEEDSAK1-O/2021 (Ws/NC/AK1-O/2021), A/whooper swan/Northern China/11.03 IMEEDSAK2-O/2021 (Ws /NC/AK2-O/2021) e A/black swan/Eastern China/11.15 ZJHZ74-Lg/2021 (Bs/EC/74-Lg/2021). Depositamos genomas inteiros em NMDC (https://nmdc.cnlink externo; nºs de acesso NMDCN0000RD8–NMDCN0000RDV) e GISAID (https://www.gisaid.orglink externo; nºs de acesso EPI195500–EPI195523). Reconstruímos árvores filogenéticas para cada gene dos 3 isolados H5N1 juntamente com vírus de referência do GISAID e do National Center for Biotechnology Information (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/FLU/Database/nph-select.cgilink externo), usando o método de máxima verossimilhança com um modelo geral reversível no tempo mais distribuição gama em RAxML 8.2.12 (https://cme.h-its.org/exelixis/web/software/raxmllink externo) ( Tabela do Apêndice 1 ). Reconstruímos árvores filogenéticas resolvidas no tempo bayesianas no BEAST 1.10.4 (https://beast.community/index.html) usando o modelo SRD06, o modelo de relógio relaxado log-normal e o modelo coalescente Skygrid. Mapeamos as coordenadas espaciais para as árvores posteriores em escala temporal pós-queima usando um modelo filogeográfico contínuo de movimento browniano. Mapeamos o tipo de hospedeiro e o subtipo de hemaglutinina (HA) ou neuraminidase (NA) em cada árvore posterior usando um modelo filogeográfico de característica discreta com extensão BSSVS para inferir o ancestral mais provável com suporte estatístico (Apêndice 2 ) .
Realizamos ensaios de inibidor de hemaglutinação (HI) (https://www.who.int/publications/i/item/manual-for-the-laboratory-diagnosis-and-virological-surveillance-of-influenzalink externo) para testar as reatividades do antissoro das vacinas H5 Re-11/Re-13/Re-14 contra esses novos isolados H5N1 e H5N8 HPAIVs identificados em 2020 ( 10 ) . Re-11 (A/duck/Guizhou/S4184/2017[H5N6], clade 2.3.4.4h) foi usado em aves na China durante dezembro de 2018 a dezembro de 2021, enquanto Re-13 (A/duck/Fujian/S1424/2020 [H5N6], clado 2.3.4.4h) e Re-14 (A/whooper swan/Shanxi/4–1/2020[H5N8], clade 2.3.4.4b) foram implantados desde janeiro de 2022 (http://www.moa.gov.cn/govpubliclink externo).
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